لقد شاركنا العديد من الاعتبارات في الأسبوع الماضي لاستخدام الترحيل الكهربائي بغشاء خلات السليلوز، وسننهي هذا الموضوع هنا اليوم كمرجع لك.
اختيار تركيز المخزن المؤقت
يكون تركيز المخزن المؤقت المستخدم في الفصل الكهربي بغشاء خلات السليولوز أقل عمومًا من ذلك المستخدم في الفصل الكهربي للورق.درجة الحموضة شائعة الاستخدام 8.6Bعادةً ما يتم اختيار المخزن المؤقت التحكيمي ضمن نطاق 0.05 مول/لتر إلى 0.09 مول/لتر.عند اختيار التركيز، يتم اتخاذ قرار أولي.على سبيل المثال، إذا كان طول شريط الغشاء بين الأقطاب الكهربائية في غرفة الرحلان الكهربائي هو 8-10 سم، فإن الجهد الكهربي 25 فولت مطلوب لكل سنتيمتر من طول الغشاء، ويجب أن تكون شدة التيار 0.4-0.5 مللي أمبير لكل سنتيمتر من عرض الغشاء.إذا لم يتم تحقيق هذه القيم أو تجاوزها أثناء الرحلان الكهربائي، فيجب زيادة تركيز المخزن المؤقت أو تخفيفه.
سيؤدي تركيز المخزن المؤقت المنخفض بشكل مفرط إلى حركة سريعة للنطاقات وزيادة في عرض النطاق.من ناحية أخرى، فإن التركيز المفرط للمخزن المؤقت سيؤدي إلى إبطاء ترحيل النطاق، مما يجعل من الصعب التمييز بين نطاقات فصل معينة.
تجدر الإشارة إلى أنه في الترحيل الكهربائي بغشاء خلات السليلوز، يتم تمرير جزء كبير من التيار عبر العينة، مما يولد كمية كبيرة من الحرارة.في بعض الأحيان، يمكن اعتبار تركيز المخزن المؤقت المختار مناسبًا.ومع ذلك، في ظل ظروف ارتفاع درجة الحرارة البيئية أو عند استخدام الجهد العالي، يمكن أن يتكثف تبخر الماء بسبب الحرارة، مما يؤدي إلى تركيز عازل مرتفع بشكل مفرط وحتى يتسبب في جفاف الغشاء.
حجم العينة
في الترحيل الكهربي بغشاء خلات السليولوز، يتم تحديد كمية حجم العينة من خلال عوامل مختلفة، بما في ذلك ظروف الرحلان الكهربي، وخصائص العينة نفسها، وطرق التلوين، وتقنيات الكشف.كمبدأ عام، كلما كانت طريقة الكشف أكثر حساسية، كلما كان حجم العينة أصغر، وهو أمر مفيد للفصل.إذا كان حجم العينة مفرطًا، فقد لا تكون أنماط الفصل الكهربي واضحة، كما يمكن أن يستغرق التلوين وقتًا طويلاً.ومع ذلك، عند التحليل الكمي للنطاقات الملونة المنفصلة باستخدام طرق الكشف اللونية، لا ينبغي أن يكون حجم العينة صغيرًا جدًا، حيث يمكن أن يؤدي إلى انخفاض قيم الامتصاص لبعض المكونات، مما يؤدي إلى أخطاء أعلى في حساب محتواها.وفي مثل هذه الحالات، ينبغي زيادة حجم العينة بشكل مناسب.
عادةً، يتراوح حجم العينة المضافة في كل سنتيمتر من خط تطبيق العينة من 0.1 إلى 5 ميكرولتر، أي ما يعادل كمية عينة من 5 إلى 1000 ميكروجرام.على سبيل المثال، في التحليل الكهربائي الروتيني لبروتين المصل، لا يتجاوز حجم العينة المضافة في كل سنتيمتر من خط التطبيق بشكل عام 1 ميكرولتر، أي ما يعادل 60 إلى 80 ميكروغرام من البروتين.ومع ذلك، عند تحليل البروتينات الدهنية أو البروتينات السكرية باستخدام نفس الأسلوب الكهربائي، يحتاج حجم العينة إلى زيادة في المقابل.
وفي الختام، ينبغي اختيار حجم العينة الأكثر ملاءمة بناء على شروط محددة من خلال سلسلة من التجارب الأولية.
اختيار تلطيخ الحل
عادةً ما يتم تلوين النطاقات المنفصلة في الفصل الكهربائي بغشاء خلات السليلوز قبل الكشف.تتطلب مكونات العينة المختلفة أساليب تلطيخ مختلفة، وقد لا تكون طرق التلوين المناسبة للرحلان الكهربائي لغشاء خلات السليلوز قابلة للتطبيق تمامًا على ورق الترشيح.
هناك ثلاثة مبادئ رئيسية لاختيار حل تلطيخ لهاغشاء خلات السليلوز.أولاً،يجب تفضيل الأصباغ القابلة للذوبان في الماء على الأصباغ القابلة للذوبان في الكحول لتجنب انكماش الغشاء وتشوهه الناجم عن محلول تلطيخ الأخير.بعد تلطيخ، من المهم شطف الغشاء بالماء وتقليل مدة تلطيخ.وبخلاف ذلك، قد يصبح الغشاء مجعدًا أو منكمشًا، مما قد يؤثر على الكشف اللاحق.
ثانيا، من الأفضل تحديد الأصباغ ذات تقارب تلطيخ قوي للعينة.في الترحيل الكهربائي بغشاء خلات السليلوز لبروتينات المصل، يُستخدم الأمينو الأسود 10B بشكل شائع بسبب تقاربه القوي في الصبغ لمختلف مكونات بروتين المصل واستقراره.
ثالثا، ينبغي اختيار الأصباغ ذات الجودة الموثوقة.بعض الأصباغ، على الرغم من أنها تحمل نفس الاسم، قد تحتوي على شوائب تؤدي إلى خلفية داكنة بشكل خاص بعد التلوين.وقد يؤدي ذلك إلى تشويش النطاقات المفصولة جيدًا في الأصل، مما يجعل من الصعب تمييزها.
وأخيراً، من المهم اختيار تركيز محلول تلطيخ.من الناحية النظرية، قد يبدو أن تركيز محلول تلطيخ أعلى من شأنه أن يؤدي إلى تلطيخ أكثر شمولاً لمكونات العينة ونتائج تلطيخ أفضل.ولكن هذا ليس هو الحال.إن تقارب الارتباط بين مكونات العينة والصبغة له حد معين، والذي لا يزيد مع زيادة تركيز محلول الصبغ.على العكس من ذلك، فإن تركيز محلول الصبغ العالي بشكل مفرط لا يؤدي إلى إهدار الصبغة فحسب، بل يجعل من الصعب أيضًا الحصول على خلفية واضحة.علاوة على ذلك، عندما تصل كثافة اللون إلى قيمة قصوى معينة، فإن منحنى امتصاص الصبغة لا يتبع علاقة خطية، خاصة في القياسات الكمية.
تفاصيل يجب معرفتها حول التكنولوجيا الحيوية في بكين Liuyi's غشاء خلات السليلوزخزان الرحلان الكهربي وتطبيقه الكهربي، يرجى زيارة هنا:
لتجربة فصل بروتين المصل بواسطة غشاء خلات السليولوز
لالرحلان الكهربي بغشاء خلات السليولوز
لينبغي وضع العديد من الاعتبارات في الاعتبار عند استخدام الفصل الكهربائي بغشاء خلات السليلوز (1)
إذا كان لديك أي خطة شراء لمنتجاتنا، فلا تتردد في الاتصال بنا.يمكنك أن ترسل لنا رسالة على البريد الإلكتروني[البريد الإلكتروني محمي]أو[البريد الإلكتروني محمي]، أو يرجى الاتصال بنا على +86 15810650221 أو إضافة Whatsapp +86 15810650221، أو Wechat: 15810650221.
مرجع:الرحلان الكهربائي (الطبعة الثانية) للسيد لي
وقت النشر: 06 يونيو 2023