تجربة الرحلان الكهربي للهيموجلوبين

مبدأ التجربة

يهدف التحليل الكهربي للهيموجلوبين إلى اكتشاف وتأكيد مختلف أنواع الهيموجلوبين الطبيعية وغير الطبيعية.

نظرًا لاختلاف الشحنات والنقاط الكهربية لأنواع الهيموجلوبين المختلفة، في محلول عازل معين للأس الهيدروجيني، عندما تكون النقطة الكهربية للهيموجلوبين أقل من الرقم الهيدروجيني للمحلول المنظم، يحمل الهيموجلوبين شحنة سالبة ويهاجر نحو القطب الموجب أثناء الرحلان الكهربائي. وعلى العكس من ذلك، يتحرك الهيموجلوبين ذو الشحنة الموجبة نحو الكاثود.

تحت جهد معين وبعد وقت رحلان كهربائي محدد، تظهر الهيموجلوبينات ذات الشحنات والأوزان الجزيئية المختلفة اتجاهات وسرعات مختلفة للهجرة. وهذا يسمح بفصل المناطق المتميزة، ويمكن إجراء تحليل المسح اللوني أو الكهربي اللاحق على هذه المناطق لتحديد كمية الهيموجلوبين المختلفة. الطريقة الأكثر شيوعًا هي التحليل الكهربائي بغشاء خلات السليلوز بدرجة حموضة 8.6.

داخل السيتوبلازم، تتأكسد مجموعات جلايكول الإيثيلين (CHOH-CHOH) الموجودة في مواد الجليكوجين أو عديد السكاريد (مثل عديدات السكاريد المخاطية، والبروتينات المخاطية، والبروتينات السكرية، والشحميات السكرية، وما إلى ذلك) بواسطة حمض دوري ويتم تحويلها إلى مجموعات ألدهيد (CHO-CHO). تتحد مجموعات الألدهيد هذه مع كاشف شيف عديم اللون ذو اللون الأحمر الأرجواني، لتشكل صبغة حمراء أرجوانية تترسب في أماكن وجود السكريات في الخلية. يُعرف هذا التفاعل باسم تلطيخ حمض شيف الدوري (PAS)، والذي كان يُشار إليه سابقًا باسم تلطيخ الجليكوجين.

طريقة التجربة

مواد:خلات السليلوزمذكرةالنخالة، جهاز الكهربائي(DYCP-38C ومصدر الطاقة DYY-6C), أداة تحميل العينات المتميزة(ماصة)، مقياس الطيف الضوئي، الكوفيت اللونية, المخازن المؤقتة.

المخزن المؤقت:

(1) المخزن المؤقت لدرجة الحموضة 8.6 TEB: زن 10.29 جرام تريس، 0.6 جرام EDTA، 3.2 جرام حمض البوريك، وأضف الماء المقطر إلى 1000 مل.

(2) محلول البورات: زن 6.87 جم من البوراكس و 5.56 جم من حمض البوريك، وأضف الماء المقطر إلى 1000 مل.

إجراء:

Pتعويض محلول الهيموجلوبين

خذ 3 مل من الدم المحتوي على الهيبارين أو سترات الصوديوم كمضاد للتخثر. أجهزة الطرد المركزي عند 2000 دورة في الدقيقة لمدة 10 دقائق وتجاهل البلازما. غسل خلايا الدم الحمراء ثلاث مرات بالمحلول الملحي الفسيولوجي (750 دورة في الدقيقة، 5 دقائق بالطرد المركزي في كل مرة). أجهزة الطرد المركزي عند 2200 دورة في الدقيقة لمدة 10 دقائق وتجاهل المادة طافية. أضف كمية مساوية من الماء المقطر، ثم أضف 0.5 مرة حجم رابع كلوريد الكربون. يهز بقوة لمدة 5 دقائق، ثم الطرد المركزي عند 2200 دورة في الدقيقة لمدة 10 دقائق لجمع الحل Hb العلوي لاستخدامه لاحقا.

نقع الغشاء

قطع غشاء خلات السليلوز إلى شرائح قياس 3 سم × 8 سم. انقعها في محلول pH 8.6 TEB حتى تشبع تمامًا، ثم قم بإزالتها وجففها باستخدام ورق الترشيح.

اكتشاف

استخدم ماصة لرصد 10 ميكرولتر من محلول الهيموجلوبين عموديًا على غشاء خلات السليلوز (الجانب الخشن)، على بعد حوالي 1.5 سم من الحافة.

الرحلان الكهربائي

صب محلول بورات العازلة في غرفة الكهربائي. ضع غشاء خلات السليلوز مع الجانب المرقط في نهاية الكاثود للغرفة. تشغيل على 200 فولت لمدة 30 دقيقة.

شطف

اقطع منطقتي HbA وHbA2، ثم ضعهما في أنابيب اختبار منفصلة، ​​ثم أضف 15 مل و3 مل من الماء المقطر، على التوالي. يهز بلطف للتخلص من الهيموجلوبين تماما، ثم يخلط.

قياس الألوان

قم بصفر الامتصاص باستخدام الماء المقطر لمحلول الشطف وقياس الامتصاص عند 415 نانومتر.

حساب

HbA2(%) = امتصاص أنبوب HbA2 / (امتصاص أنبوب HbA × 5 + امتصاص أنبوب HbA2) × 100%

حساب النتائج التجريبية

النطاق المرجعي لدرجة الحموضة 8.6 TEB للفصل الكهربائي لخلات السليلوز: HbA > 95%، HbA2 1%-3.1%

ملحوظات

لا ينبغي أن يكون وقت الرحلان الكهربائي طويلاً. يجب ألا يجف غشاء خلات السليلوز أثناء الترحيل الكهربائي. أوقف الترحيل الكهربي عندما يتم فصل HbA وHbA2 بشكل واضح. يمكن أن يؤدي الرحلان الكهربائي المطول إلى انتشار النطاق وعدم وضوحه.

تجنب استخدام الكثير من العينة. يمكن أن يؤدي سائل الهيموجلوبين الزائد إلى انفصال الشريط أو تلطيخ غير كافٍ، مما يؤدي إلى ارتفاع مستويات HbA بشكل خاطئ.

منع تلوث غشاء خلات السليلوز بالبروتينات.

لا ينبغي أن يكون التيار مرتفعا جدا؛ وبخلاف ذلك، قد لا تنفصل حزم الهيموجلوبين.

قم دائمًا بتضمين عينات من الأفراد الطبيعيين والهيموجلوبين غير الطبيعي المعروف كعناصر تحكم.

تقوم شركة Beijing Liuyi Biotechnology بتصنيع خزان الرحلان الكهربي الاحترافي للرحلان الكهربي للهيموجلوبين الذي هو النموذجديكب-38Cخزان الترحيل الكهربي بغشاء خلات السليلوز، ويوجد نموذجان من مصدر الطاقة بالرحلان الكهربي متاح لخزان الترحيل الكهربي بغشاء خلات السليلوزدي واي-2Cودي واي-6Cمزود الطاقة.

وفي الوقت نفسه، توفر شركة Beijing Liuyi Biotechnology غشاء خلات السليلوز للعملاء، ويمكن تخصيص حجم غشاء خلات السليلوز. مرحبا بكم في طلب عينات ومزيد من المعلومات.

تتمتع العلامة التجارية Beijing Liuyi بتاريخ يزيد عن 50 عامًا في الصين ويمكن للشركة توفير منتجات مستقرة وعالية الجودة في جميع أنحاء العالم. من خلال سنوات من التطوير، فهو يستحق اختيارك!

نحن نبحث الآن عن شركاء، ونرحب بكل من خزان الرحلان الكهربائي OEM والموزعين.

إذا كان لديك أي خطة شراء لمنتجاتنا، فلا تتردد في الاتصال بنا. يمكنك أن ترسل لنا رسالة على البريد الإلكتروني[البريد الإلكتروني محمي]أو[البريد الإلكتروني محمي]، أو يرجى الاتصال بنا على +86 15810650221 أو إضافة Whatsapp +86 15810650221، أو Wechat: 15810650221