مبدأ
الفصل الكهربائي لفيلم خلات السليلوز هو طريقة للرحلان الكهربائي باستخدام فيلم خلات السليلوز كدعم. تسمى الظاهرة التي تتحرك فيها الجسيمات المشحونة نحو القطب المعاكس تحت تأثير المجال الكهربائي بالرحلان الكهربائي. نظرًا لأن كل بروتين له نقطة تساوي الجهد الكهربي محددة، إذا تم وضع البروتين في محلول ذي درجة حموضة أقل من نقطة التساوي الكهربي، فسيتم شحن البروتين بشكل إيجابي ويتحرك نحو القطب السالب. على العكس من ذلك، فإنه يتحرك إلى القطب الموجب. نظرًا لأن سرعة جزيئات البروتين التي تتحرك في مجال كهربائي ترتبط بشحنتها، وشكل وحجم الجزيئات، فيمكن فصل البروتينات المختلفة عن طريق الفصل الكهربائي. يحتوي المصل على مجموعة متنوعة من البروتينات، وجميعها لها نقاط كهربية عند الرقم الهيدروجيني 7.5 أو أقل. عندما يتم وضع المصل في محلول pH 8.6 لتشغيل الرحلان الكهربائي، فإن جميع بروتينات المصل تكون مشحونة بشكل سلبي وستتحرك نحو الجانب الموجب في المجال الكهربائي. نظرًا لأن بروتينات المصل المختلفة لها شحنات مختلفة عند نفس الرقم الهيدروجيني، فإن الجزيئات الجزيئية تختلف في الحجم، وبالتالي تختلف سرعة الهجرة، ويتم فصلها عن طريق الرحلان الكهربائي. النقاط الكهربية والأوزان الجزيئية لبروتينات المصل موضحة في الجدول أدناه:
| بروتين | نقاط تساوي الجهد الكهربي (PI) | الوزن الجزيئي |
| الزلال | 4.88 | 69000 |
| α1-جلولين | 5.00 | 200000 |
| α2-جلولين | 5.06 | 300000 |
| بيتا الجلولين | 5.12 | 9000~150000 |
| γ-الجلولين | 6.85 ~ 7.50 | 156000 ~ 300000 |
تتمثل التجربة في فصل البروتينات المختلفة في مصل الدم باستخدام غشاء خلات السليلوز (اختصار CAM) كوسيلة داعمة. CAM هو نوع من الرغوات الرغويةeفيلم ذو زي جيد، وسمك 0.1 مم - 1.5 مم، والذي يحتوي على امتصاص معين للماء.
المواد والأدوات والكواشف الخاصة بالرحلان الكهربائي CAM
العينات:مصل الدم البشري السليم
أداة:مصدر الطاقة DYY-6C، خزان الرحلان الكهربائي DYCP-38C، تحميل عينة متفوق WD-9404
الكواشف
1) غشاء خلات السليلوز 7X9 سم
2) محلول الباربيتول المنظم PH 8.6 (القوة الأيونية 0.05-0.09، إنه وقت 0.06tid.): خذ 1,84 جم من حمض ثنائي إيثيل الباربيتوريك، ثم خذ 1.03 جم من ثنائي إيثيل الصوديوم بنتوباربيتال، وأضف بعض الماء المقطر لتسخينه حتى يذوب، واصنعه ما يصل إلى 1000 مل.
3) وصمة عار: بونسو إس 0.2 جم، ثلاثي كلورو أسيتيك 3 جم، أضف 100 مل من الماء المقطر؛
4) TBS/T أو PBS/T: 45 مل إيثانول 95٪، 5 مل حمض أسيتيك جليدي، أضف 50 مل ماء مقطر؛
5) محلول التنظيف: 70 مل من الإيثانول اللامائي، 30 مل من حمض الأسيتيك الجليدي.
تجربة ميتوd
1) تحضير الغشاء: اغمر الغشاء في محلول الباربيتول المنظم لمدة 30 دقيقة إلى 8 ساعات، ثم أخرجه، وأزل المحلول الإضافي بواسطة ورق ماص.
2) تحميل العينات: قم بتمييز الجانب الخشن والجانب الأملس للغشاء، ووضع علامة على خط على مسافة 1.5 سم إلى الطرف العلوي على الجانب الخشن. قم بتحميل العينات باستخدام أداة تحميل العينات الفائقة على الجانب الخشن. ملاحظة: يجب تحميل العينات على الجانب الخشن من الغشاء. بعد اختراق عينات المصل بالكامل في الغشاء، اقلب الغشاء، ثم ضع الجانب الخشن (مع العينات) متجهًا لأسفل نحو الخزان، ثم يتم وضع نهاية العينات في القطب السالب.
3) الرحلان الكهربائي: قم بتشغيل مصدر الطاقة، 0.4～غشاء 0.6 متر أ/سم، وقت التشغيل 30-45 دقيقة. بعد تشغيل الرحلان الكهربائي، قم بإيقاف تشغيل الطاقة.
4) وصمة عار ونظيفة: أخرج الغشاء من الخزان واغمرهit في محلول الصبغة لمدة 5 دقائق، ثم نظفه في محلول التنظيف مرارًا وتكرارًا لمدة 3-4 مرات حتى يصبح لون الخلفية واضحًا. يجب أن تظهر بروتينات المصل على الأشرطة، وعادة ما تكون هناك خمس مناطق، تشكل النهاية العليا للخط المحدد، الألبومين، α1-جلولين، α2-جلولين، β-جلولين، γ-جلولين.
5) الحفظ: وضع الرحلان الكهربائي الجاففرقةفي محلول التنظيف لمدة 10-15 دقيقة، ثم أخرجيه وألصقيه على كوب نظيف، وبعد أن يجف يصبح طبقة شفافةفرقة.
تجربةنتيجة
تأثير فصل عينات المصل جيد، ولا توجد ظاهرة مخلفات الفرقة. وتختلف قابلية تكرار النتائج باختلاف إجراءات الاختبار وطرق المجرب، وتكون التكرارية عالية.
خاتمة
نظام الكشف الكهربي السريري السريع (خزان الكهربائيديكب-38C،مزود الطاقةDYY-6C وتحميل العينات الفائق WD-9404) من إنتاجناشركة بكين Liuyi للتكنولوجيا الحيوية المحدودةيلبي المتطلبات التجريبية،والنتائج قابلة للتكرار وبسيطة وسريعة ومناسبةتدريسبحث.
بكين ليوييالتكنولوجيا الحيوية المحدودة متخصصة في تصنيع منتجات الرحلان الكهربائي لصناعة علوم الحياة، والتيتتمتع الشركة بتاريخ يزيد عن 50 عامًا في الصين ويمكن للشركة تقديم منتجات مستقرة وعالية الجودة في جميع أنحاء العالم. من خلال سنوات من التطوير، فهو يستحق اختيارك!
نحن نبحث الآن عن شركاء، ونرحب بكل من خزان الرحلان الكهربائي OEM والموزعين.
لمزيد من المعلومات عنا، يرجى الاتصال بنا عن طريق البريد الإلكتروني[البريد الإلكتروني محمي]أو[البريد الإلكتروني محمي].
وقت النشر: 14 نوفمبر 2022